ATP(Adenosine Triphosphate),中文名為腺嘌呤核苷三磷酸,又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于細菌等微生物細胞內(nèi),ATP是微生物新陳代謝的能量物質(zhì)。ATP生物發(fā)光法是利用ATP試劑中若干組分如熒光素-熒光素酶等與被測樣本反應(yīng)產(chǎn)生光子,再利用專門研制的熒光檢測儀來捕捉和檢測發(fā)光值,由于被測樣本所含細菌等微生物的數(shù)量與所含的ATP值、以及ATP值與發(fā)光值之間存在一定的函數(shù)關(guān)系,因此通過檢測發(fā)光值即能得到被測標(biāo)本所含細菌等微生物含量。
國內(nèi)外ATP儀器
手持ATP儀比臺式ATP儀更適合現(xiàn)場快速檢測
為了滿足現(xiàn)場快速檢測的需求,ATP熒光檢測儀宜選擇手持ATP熒光檢測儀(也叫手持式ATP熒光檢測儀),而實現(xiàn)流動狀態(tài)即時檢測,因為盡管大型的臺式ATP熒光檢測儀在靈敏度方面可能優(yōu)于手持式ATP儀,但它只能在實驗室狀態(tài)下使用,不利于餐飲服務(wù)、醫(yī)療感控等流動場所現(xiàn)場檢測。
ATP方法使用和評價
ATP熒光檢測法能在十幾秒內(nèi)實現(xiàn)檢測,它大大提升了傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)法24-48小時的工作效率,ATP方法的實現(xiàn)包括儀器、試劑和如何使用三大要素。
儀器
當(dāng)儀器和試劑配合使用,整體靈敏度達到10-10摩爾ATP范圍時,可以用于 食品表明微生物檢測、手衛(wèi)生檢測、餐飲器具潔凈度檢測、重點科室和重要活動場所(如奧運會、世博會、人大政協(xié)會議等)物表檢測和衛(wèi)生安保、食品加工器具、工作臺等關(guān)鍵控制點消毒結(jié)果檢測、醫(yī)療環(huán)境工作平臺(器械表面、內(nèi)窺鏡、空調(diào)進出氣口)衛(wèi)生學(xué)即時評估,其實時監(jiān)測數(shù)據(jù)能有效配合HACCP或GMP體系管理的要求;可用于更高要求的檢測如復(fù)用醫(yī)療器械清洗效果后評估和二次清潔處理評價、醫(yī)療用水檢測等。當(dāng)然目前國外ATP設(shè)備和試劑的研發(fā)已經(jīng)向更高目標(biāo)——可檢測到1O至10摩爾水平的ATP努力,檢測試劑也可達到5個細菌細胞的水平。
試劑
的ATP試劑盒,必須是可去除游離ATP和體細胞ATP,只針對細菌細胞ATP檢測,所謂去除干擾物,這是基本要求。其次熒光素酶、蟲螢光素、裂解液、取樣拭子等組分設(shè)計成一體化,整體便于現(xiàn)場攜帶方便檢測使用,試想如果不是ATP試劑一體化拭子形式,而是各組分瓶瓶罐罐帶到現(xiàn)場臨時配制試劑如何能做到準(zhǔn)確性和現(xiàn)場快速檢測呢?
如何使用
取樣
是影響準(zhǔn)確性和一致性的關(guān)鍵之一,可按照<<醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)附錄A(規(guī)范性附錄)采樣及檢查方法>>等規(guī)范要求再參照手持式ATP儀說明書采樣、檢測、計算得出結(jié)果并記錄報告。采樣:(面積類)將ATP拭子采樣棒一支在物體表面或雙手指曲面從指跟到指端來回涂擦個兩次(一只手涂擦面積約30cm2),并隨之轉(zhuǎn)動采樣拭子。(體積類)將ATP拭子采樣棒一支在待測液體充分浸濕。檢測:將拭子放入手持ATP儀,獲得被測樣本與細菌污染程度相對應(yīng)的ATP生物熒光值,得出菌落數(shù)指標(biāo)(詳見下文操作步驟及定標(biāo)評價)。
結(jié)果判讀
以上取樣、檢測全過程在1分鐘之內(nèi)快速完成,比起24-48小時的傳統(tǒng)細菌培養(yǎng)優(yōu)勢巨大。細菌數(shù)量與細菌內(nèi)所含ATP量有明確的相關(guān)性,通過檢測ATP含量可間接得出細菌數(shù)量,即ATP熒光檢測儀檢測結(jié)果顯示的發(fā)光值——相對照度單位RLU讀數(shù)與常規(guī)細菌培養(yǎng)法結(jié)果菌落數(shù)CFU具有很高的相關(guān)性,兩者沒有統(tǒng)計上的顯著差異,因此這也是ATP熒光法細菌檢測的理論基礎(chǔ)。舉例來說,某食品加工廠上班前使用ATP檢測儀對生產(chǎn)工人進行手衛(wèi)生檢測,檢測值<80RLU合格參考值時,判定洗手消毒合格;檢測值≥80RLU合格參考值時判定洗手消毒不合格,需要重新洗手直至滿足規(guī)定的合格參考值才能上崗工作,合格參考值(如80)的確定需科學(xué)合理,不同應(yīng)用場合不建議規(guī)定統(tǒng)一的參考值,須根據(jù)不同品牌ATP熒光儀、ATP試劑、被測對象潔凈度不同要求等具體情況和對一定量的檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析來確定。